層析色譜柱(chromatographycolumn)是常用的分離和純化化合物的工具。它基于樣品中不同組分在固定相和流動(dòng)相之間的分配差異。通常由一根空心的管狀柱體構(gòu)成,內(nèi)壁附著有吸附劑或離子交換劑等固定相。常見的固定相材料包括硅膠、糖凝膠、聚合物、磷酸二銨改性硅膠等。這些固定相具有不同的化學(xué)性質(zhì)和親和性,適用于不同類型的樣品分離。
在層析色譜過程中,樣品混合物被注入柱中,流動(dòng)相(也稱為移動(dòng)相)通過柱體,樣品中的組分根據(jù)其與固定相的親和性差異被分離出來。移動(dòng)相的選擇也是分離效果的關(guān)鍵因素之一。常見的移動(dòng)相包括水、乙醇、甲醇、醋酸等溶劑,它們可以根據(jù)需要進(jìn)行混合以獲得分離效果。
層析色譜柱的操作使用步驟:
1.初次使用柱子前,先用高純?nèi)軇?如甲醇或乙腈)沖洗柱子,以去除柱內(nèi)的雜質(zhì)和殘留物。
2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇合適的柱子,并連接至色譜系統(tǒng)。
3.將樣品溶解于溶劑中,使用注射器將樣品注入柱子之中。
4.打開色譜系統(tǒng),并設(shè)置適當(dāng)?shù)牧魉俸蜏囟葪l件。
5.檢測(cè)期間,仔細(xì)監(jiān)控色譜柱的壓力,確保柱子正常運(yùn)行。
6.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,關(guān)閉色譜系統(tǒng)。
層析色譜柱的維護(hù)保養(yǎng)方法:
1.柱子使用完畢后,應(yīng)先進(jìn)行洗脫,使用純?nèi)軇┻M(jìn)行反沖洗,將殘留物洗凈。
2.盡量避免柱子干燥,尤其是長(zhǎng)期不使用時(shí),建議用溶劑進(jìn)行保濕,以避免柱子內(nèi)部的填料受損。
3.避免使用過高的壓力,以免對(duì)柱子造成損害。
4.定期檢查柱子連接處是否有泄漏,如有泄漏應(yīng)及時(shí)處理。
5.定期進(jìn)行柱子的回收評(píng)估,以確定是否需要更換柱子。通常來說,柱子的使用壽命應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況來定,根據(jù)柱子的分離性能、分離效果進(jìn)行評(píng)估。